端粒相对长度检测试剂盒使用说明书(定量PCR法)

【产品规格】

1. TL50 50 * 3 Reaction

2. TL100 100 * 3 Reaction

【产品说明】

端粒（Telomeres）：是真核生物线性染色体末端的非编码串联重复性(TTAGGG)n阵列，端粒长度的变化，与衰老、癌症、或神经退行性等多种疾病相关。定量PCR法是检测端粒长度的经典技术，用时短，操作简单，结果准确，适用于批量样本检测。

本产品试剂盒采用双色荧光 qPCR（SYBRgreen+VIC）检测端粒相对长度，检测对象为血液、口腔拭子或细胞DNA。该试剂盒具有以下特点。

1. 稳定：全程闭管操作，无交叉污染。

2. 可靠：端粒与内参单管检测，减少孔间干扰。内参基因为多拷贝，与端粒量差降低。

3. 方便：操作简单，无需电泳步骤。

4. 定量： ΔCT 值，可定量检测端粒相对长度。

【运输及保存条件】

低温冷冻运输， -20℃保存，有效期 1 年， 冻融以后，4℃保存，有效期4周。

【产品组分】

注：本试剂盒提供试剂，使用前请上下轻柔颠倒十次混匀，后低速离心、小心开启。避免起泡。

【操作步骤】

1. 样品质控

使用商业化DNA抽提试剂盒提取血液、细胞或组织DNA，DNA纯度A260/A280≈1.8，检测样品浓度标化为15~20ng/µL，上样4µL。

注：标准品浓度已标化为15~20ng/µL，上样4µL。样品及标准品浓度过高或过低会影响扩增效率，对实验造成干扰，测量结果误差较大。

1. qPCR反应体系及条件

反应体系以20µL为例

PCR仪设置以 ABI 7500为例，其他型号定量PCR仪应通过标准品进行参数校正或咨询专业技术人员。

【基线设置】

内参基线设定：以标准品基线设定内参基线，将内参的基线设定为6~12个循环。

端粒基线设定：以标准品基线设定端粒基线，将端粒的基线设定为3~7个循环。

【阈值设置】

内参阈值设定：以标准品CT值设定内参扩增曲线阈值，将内参的CT 值定为17±1。

端粒阈值设定：以标准品CT值设定端粒扩增曲线阈值，将端粒的CT 值定为12±1 。

说明：

（1） 如果标准品的内参CT 值>25，但阴性对照管的内参CT 值正常， 表明试剂盒扩增效率下降或仪器运行障碍。

（2） 如果阴性对照管的内参或端粒CT＜25，表明在环境或加样过程中存在轻微污染。

备注：

1. 样本检测以及标准品的使用应做技术上三重复，阴性对照做单重复。

2. 如果检测样本为血液DNA，可以将所得端粒相对长度在上海翼和应用生物技术有限公司构建的1500例中国人群数据库比对，评估样本个体端粒的相对长度；若选用其他样本，建议自行构建数据库并做进一步分析。

3. 端粒长度计算方法（T/S）：先分别计算标准品与样品的ΔCT=CT（端粒）-CT（内参）

再计算 T/S=2-(ΔCT(样品)-ΔCT（标准品）)

注：T为待测样品，S为标准品，T/S为待测样品与标准品的端粒相对长度比